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          行業資訊

          離心機如何從冷凍材料中提取DNA?

          作者:author來源:湘儀集團時間:2022/4/21 10:50:34

          離心機是借離心力分離液相非均一體系的設備。根據物質的沉降系數、質量、密度等的不同,應用強大的離心力使物質分離、濃縮和提純的方法稱為離心。一般說,離心機轉速在30000r/min以上的稱為超速離心。離心技術特別是超速離心技術是分子生物學、生物化學研究和工業生產中不可缺少的手段。離心機不僅可測物質的分子量,還可檢驗物質的純度、構象、沉降系數等。因此離心技術在生物學研究中占有重要的地位,是分離、純化細胞、蛋白、核酸、酶和進行病毒分離的方便有效的工具。
            使用離心機可以進行冷凍材料DNA的粗提:
            一、所需試劑
            1.2倍CTAB提取緩沖液:100mmol/L Tris·Cl(pH8.0),20 mmol/L EDTA,1.4mol/L NaCl,2%CTAB,40mmol/Lβ-巰基乙醇。
            2.10%CTAB:10%CTAB,0.7mol/L NaCl。
            3.1倍CTAB沉淀緩沖液:50mmol/L Tris·Cl(pH8.0),10mmol/L EDTA,1%CTAB,20mmol/Lβ-巰基乙醇。
            二、具體操作
            1.取1-50g新鮮植物材料,于液氮中研成粉。
            2.將凍粉轉入預冷的離心管中,立即加入等體積65℃預熱的2倍CTAB提取緩沖液充分混勻,65℃保溫10-20min,其間不時搖動。
            3.加入等體積的氯仿/異戊醇,輕緩顛倒離心管混勻,室溫下,12000r/min離心10-20min。
            4.將上清液轉入另一離心管中,加入1/10體積的10%CTAB,混勻,加入等體積的氯仿/異戊醇,顛倒離心管混勻,室溫、12000r/min離心10min。
            5.取上相,重復d操作1次。
            6.將上相轉入新的經硅烷化處理的離心管中,加入1-1.5倍體積的1倍CTAB沉淀緩沖液,混勻,室溫下放置30min,觀察沉淀生成。如無明顯沉淀生成,延長放置時間,隨放置時間延長,沉淀量增加。
            7.3500-4000r/min離心5-10min,去上清液,沉淀吹干,備純化用。
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          離心機如何從冷凍材料中提取DNA?

          來源:湘儀集團時間:2022/4/21 10:50:34

          離心機是借離心力分離液相非均一體系的設備。根據物質的沉降系數、質量、密度等的不同,應用強大的離心力使物質分離、濃縮和提純的方法稱為離心。一般說,離心機轉速在30000r/min以上的稱為超速離心。離心技術特別是超速離心技術是分子生物學、生物化學研究和工業生產中不可缺少的手段。離心機不僅可測物質的分子量,還可檢驗物質的純度、構象、沉降系數等。因此離心技術在生物學研究中占有重要的地位,是分離、純化細胞、蛋白、核酸、酶和進行病毒分離的方便有效的工具。
            使用離心機可以進行冷凍材料DNA的粗提:
            一、所需試劑
            1.2倍CTAB提取緩沖液:100mmol/L Tris·Cl(pH8.0),20 mmol/L EDTA,1.4mol/L NaCl,2%CTAB,40mmol/Lβ-巰基乙醇。
            2.10%CTAB:10%CTAB,0.7mol/L NaCl。
            3.1倍CTAB沉淀緩沖液:50mmol/L Tris·Cl(pH8.0),10mmol/L EDTA,1%CTAB,20mmol/Lβ-巰基乙醇。
            二、具體操作
            1.取1-50g新鮮植物材料,于液氮中研成粉。
            2.將凍粉轉入預冷的離心管中,立即加入等體積65℃預熱的2倍CTAB提取緩沖液充分混勻,65℃保溫10-20min,其間不時搖動。
            3.加入等體積的氯仿/異戊醇,輕緩顛倒離心管混勻,室溫下,12000r/min離心10-20min。
            4.將上清液轉入另一離心管中,加入1/10體積的10%CTAB,混勻,加入等體積的氯仿/異戊醇,顛倒離心管混勻,室溫、12000r/min離心10min。
            5.取上相,重復d操作1次。
            6.將上相轉入新的經硅烷化處理的離心管中,加入1-1.5倍體積的1倍CTAB沉淀緩沖液,混勻,室溫下放置30min,觀察沉淀生成。如無明顯沉淀生成,延長放置時間,隨放置時間延長,沉淀量增加。
            7.3500-4000r/min離心5-10min,去上清液,沉淀吹干,備純化用。
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